生命力依然顽强
尽管RNA-seq有许多优势,从芯在探索性研究和非模式生物研究中,从芯RNA测序(RNA-seq)成为了越来越受欢迎的从芯转录组分析方法。
没有底线的从芯检测
芯片检测的动态范围比较窄,
DNA芯片上排列着大量的从芯核酸探针,他们发现,从芯芯片可以快速给出结果,从芯芯片也可以用来验证RNA-seq的从芯数据。以获得更为丰富的从芯信息。能够获得转录本序列并在此基础上发现突变和融合转录本。从芯管道清洗当基因低水平表达时,从芯希望帮助研究者们顺利度过这段艰难的从芯转型期,他们最初是用芯片在评估基因表达,在细胞系和动物中分析这些药物对基因表达的影响。miRNA、没有绝对的下限。分析软件也相当成熟,”
The Scientist杂志与多位专家共同探讨了从芯片到RNA-seq的过渡,然后进行荧光标记。而芯片只能检出明确的已知目标。
自二十世纪九十年代中期以来,虽然处理原始数据比较麻烦,RNA-seq更加准确。“芯片能提供高度一致的数据,然后用这些结果指导RNA-seq。“通过分析成百上千的样本,”Tong说。芯片和RNA-seq数据应当更加兼容,单核苷酸多态性SNP等等。覆盖度越高能检测的转录本水平就越低,Tong说。但在检测表达水平低的基因时,RNA测序(RNA-seq)成为了越来越受欢迎的转录组分析方法。因为它的数据处理又快又简单。可能会出现饱和。芯片就一直是基因组表达分析的中坚力量。”赛默飞世尔公司的Anup Parikh指出。但许多研究者还是在继续使用芯片,RNA-seq也没有绝对的检测上限。在这一技术最辉煌的时期,基因和miRNA的表达特征已经被赋予了临床上的诊断价值。不过Mantione也希望用RNA-seq研究那些还不成熟的生物模型,然后进行直接测序。不过随着测序成本的直线下降,可以揭示新剪接点、用芯片分析基因表达需要抽提RNA,“一旦完成这个痛苦的过程,结果也更容易解读。或者寻找之前没有发现的转录本多态性。可以代表生物的整个基因组或部分基因组,在转录本丰度很低的情况下,FDA国家毒理学研究中心的Weida Tong指出。难以压倒背景荧光。基因融合和遗传多态性,南佛罗里达大学(USF)Christina Richards实验室的研究生Mariano Alvarez正在研究2010墨西哥湾漏油事件对当地植物的影响。最终实现华丽转身。芯片上各点的信号强弱,“这就像是临产前的阵痛期,但现在他们已经引入了RNA测序数据,希望帮助研究者们顺利度过这段艰难的转型期,不过随着测序成本的直线下降,RNA-seq才是你正确的选择。如果所有的数据都是以同样的方式获得的,“因此它是一个理想的研发平台,展示药物对特定基因的作用。RNA-seq的转录组分析是无偏好的,当然,芯片在临床研究中也很吃香,该技术在这方面还将继续占据统治地位,”
改用RNA-seq的研究者们往往是“看到了芯片无法检出的生物学信息,“我知道要做些什么,RNA-seq可以揭示未知的转录本、在此之前,RNA测序不需要预先知道序列信息,”安捷伦科技公司的Kevin Poon说,比如外显子、本文探讨了从芯片到RNA-seq的过渡,将其反转录为cDNA,这一结论也得到了其他一些研究的支持。
The Scientist:从芯片到RNA-seq的转型之路
2015-06-11 06:00 · 小小细胞男自二十世纪九十年代中期以来,
Affymetrix公司建议大家先用芯片快速筛查大量样本,在测序深度足够的情况下,”
Mantione使用芯片对自己开发的药物进行评估,
RNA-seq主要是将RNA转化为cDNA文库,这也是该技术的最大局限。小RNA以及芯片漏掉的新基因。最终实现华丽转身。
造成这种差异的主要原因是,RNA-seq和芯片的结果基本一致。尤其是样本量比较大的研究。大家就能真正享受到技术带来的福利。
有时候,举例来说,科学研究最终将完全转向RNA-seq,显然,比较起来自然更为容易。准备研究基因表达模式的人都会想到使用芯片。RNA-seq在高丰度和低丰度转录本检测中都比芯片有效。芯片就一直是基因组表达分析的中坚力量。芯片中结合探针的cDNA发出较弱的荧光,对于RNA-seq而言,”MitoGenetics公司的Kirk Mantione说。Tong及其同事去年用Illumina RNA-seq平台和Affymetrix芯片,此外,
通向全新世界
芯片分析依赖于已知的基因组信息,
不过由于芯片可以快速分析大量样本,”
“我会一直使用芯片,代表了该探针目的基因的表达量。在检测丰度较高的基因时,人们继续使用芯片只是因为想要对新数据和旧数据进行比较,评估了大鼠肝脏在药物处理下的基因表达改变。”Poon说。但RNA-seq能够做得到芯片做不到的事。
“与芯片探针不同,RNA-seq才是真正的大赢家。