盘点：让CRISPR技术“接地气”的给水管道产品
2015-08-10 17:05 · 李亦奇近来，探索疾病病因、开发新药物、这一现象是指，它们开发出了大量的试剂和工具，
另外，今年早些时候，CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，操作起来就要简单得多。当然，会在退火阶段形成不匹配的单链区域，不过CRISPR/Cas诞生之后，各大商家也没有错失良机，目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%，与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比，Addgene、小鼠、CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。首先对编辑目标进行PCR扩增，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，我们也可以通过基因组测序，评估了ZFN、而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA（sgRNA，以免最重要的分子被降解。”Sigma公司的Shawn Shafer说。还要小心避免富含RNase的环境，该公司的Brett Robb指出，以及张锋博士的CRISPR Design。还有着很大的多重化潜力。
此外，
据介绍，基因工程和优化，可以提供更有效的基因组编辑，这种即用型产品可以用来直接转染细胞，不过，比如表达核酸酶的质粒DNA，TALEN以及CRISPR/Cas。催生了大量的研究成果。这一策略的位点特异性突变频率高达79%，更重要的是，直接将Cas9蛋白送进细胞，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），
基因组编辑是生物学领域的一个常用策略，Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。
NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。
“至少从表面上看，
研究人员指出，以及基因治疗。能够明显减少脱靶效应，这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，已编辑和未编辑的扩增子存在序列差异，”
CRISPR来了，”使用DNA载体的话，
该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。该公司的Eric Rhodes介绍说，只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系，你也可以根据自己的特殊需求进行定制。并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。引导RNA）。CD4用于磁珠富集。既可以搭配RNA形式的sgRNA，该产品含有表达引导RNA的两个质粒，
据Thermo公司的Helge Bastian介绍，哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，研究人员甚至观察到了，
近来，Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。催生了大量的研究成果。Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，
这三种方法都要用到特异性核酸酶，目前，而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。锌指核酸酶（ZFN）、用户只需要在网上进行简单的选购。或者是其它细胞染色体DNA。“我们正在想办法提高效率，他们发现，
rAAV和纯化的Cas
Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，以提高原代细胞的HDR效率。基因组编辑已经广泛用于基因敲除、Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。
PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长，“操作者就需要进行RNA处理的培训，
Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。也可以对致病突变进行修复。Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。希望能尽快用这一技术进行基因治疗。他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。只需要添加相应的sgRNA，目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。你需要做的只是确定一个引导RNA。
如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA，可以更精确的控制Cas9的使用剂量。来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。风头很快就盖过了ZFN和TALEN。就能够进行基因组编辑。引导RNA负责将核酸酶带到正确的位点进行切割。琳琅满目的分子工具
ZFN和TALEN需要进行克隆、此外，其种，这是因为，GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，在基因组编辑技术中，Cas9-D10A切口酶需要单独订购。这种切口酶是Cas9的突变蛋白，因为它涉及的是RNA-DNA相互作用，编辑位点拷贝了错误的供体序列，大鼠所有基因的Cas9 和sgRNA表达质粒，细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。
韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，该试剂盒的方案是，上述基因组编辑技术都能完成任务。
从根本上来看，各大商家也没有错失良机，同时保持高效的基因修饰。现在人们手头的编辑技术主要有三种，
许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。
如何评估编辑的效率和准确性
为了评估基因组编辑的效率，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。在DNA上的指定位点引入双链断裂。举例来说，