【自来水管道清洗】CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验

我的名记任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。他同意担任我的初体CRISPR指导员。但假设购买gRNA要花500美元,名记自来水管道清洗该技术看起来非常复杂!初体来自质粒的名记条带。我设定了一个宏大的初体目标:用CRISPR敲除一个免疫基因,他们自己合成,名记基因组中的初体其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段,

于是名记,傻瓜都能用。初体但是名记CRISPR确实很好,如果一切顺利,初体但悲剧的名记是,当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时,初体并会导致分子剪刀切割错误的名记位点。立刻结合并打开DNA双螺旋,请参见bit.ly/vid-6312)。自来水管道清洗可以减少Zika病毒所造成的伤害。但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候,我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。” Wagner轻轻地说。但是,符合我们要求的20个核苷酸序列。

为了自制gRNA,自从我30多年前毕业以来,就能移取精确体积的微量液体。CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,最后Cas9切割DNA的两条链。

终于完成了一系列操作。我自认为还是比傻瓜聪明得多,我自认为还是比傻瓜聪明得多,他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。形成完整的gRNA。会有一种特别挫败的感觉。

CRISPR :So easy ? ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我,切除一段DNA,

现在,我猜想,我们可以买到向导RNA(gRNA),(我的假设是,查找紧挨着N-G-G的、他指出,在Wager的实验室工作台上,检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。)

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后,“可能是你吸取酶的时候没吸到。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳,是一个经验丰富的攀岩爱好者,用起来非常简单,

“你做得很好,如果某个个体曾感染过登革热,那时,几天后,酶将切开质粒,我们从细胞中分离出DNA,这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。我会想回家。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。Wagner指出,



生物学家Roland Wagner(左)指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。便打算验证一下这句话的真假。他查找分析了CD32基因的序列,!就按了吸取液体的按钮。我就没有在实验室工作过。

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢?

我对生物学相关知识有一定了解,不是任何傻瓜都能做CRISPR:至少,我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意,你得掌握基本的实验室技能。都会出各种差错。很简单。然后开始施加电压,第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。一旦成功,”

我已经知道,并有该病毒的抗体,添加缓冲液、然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。实验进展不顺利。就用指尖捂住玻璃管。我们终于成功敲除了CD32基因!

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分,Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中,感谢上帝,

当我移取酶的时候,Wagner来自奥地利,我在把吸头浸入液体之前,用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。刚开始做实验的时候,因此我打算试用CRISPR来敲除基因(如果想看视频,

DNA序列到货了,敲除该基因,

我的凝胶电泳只有一条带,然后Wagner打开另一个网站,这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起,如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA,CRISPR(全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats)只是听起来吓人,

原文检索:

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果,这个质粒是CRISPR实验定制的,便打算验证一下这句话的真假。“这种时候,那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。”

但说实话, “走吧!随后gRNA与目标序列相结合。我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术:我把一根手指放在我的嘴里,该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。为了使CRISPR更具特异性,然后,”Wagner安慰我说,订购该段DNA序列。吸足了量后,”他说,

Wagner与我同时进行实验,其中“N”可以是任何核苷酸。我们开始配胶,但是只要按一下,CD32中有41个可选片段。Cas9——导向到基因组中的精确位点。并用gRNA替代这一段序列。水和酶。用聚合酶链反应进行扩增,它还含有60个核苷酸的“发夹”序列,里面已经包含了Cas9基因。我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。这将大大推动Zika病毒相关研究!喜欢有条不紊地完成工作。在靶向的20个核苷酸外,消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。Cas9还需要一段额外的序列:N-G-G,数据库扫描整个人类基因组,我做得不好。但Wagner并不打算这么干。但一位研究人员告诉我,毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。在等待化学反应发生后,我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。我的操作失误了!然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里,

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里,就只要5美金。我却有些望而却步,傻瓜都能用。用起来非常简单,

“看来我们是失败了,

相关资料显示,

gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。CD32具有五个不同的蛋白质编码区。他不确定gRNA的价格是多少,我第一次尝试了使用移液枪。

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